SN/T 2978-2011 英語 PDF (SNT2978-2011)

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SN/T 2978-2011: 動物由来製品中の鶏肉成分の検出のためのPCR法
シリアル番号 2978-2011
SN
出入国検査および検疫産業
中華人民共和国の標準
鶏肉成分の検出のためのPCR法
動物由来製品
発行日: 2011年9月9日
実施日: 2012年4月1日
発行元：国家品質監督検査総局
中国の検疫
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 試薬と材料 ... 4
4 装備 ... 5
5 標本の選択と準備 ... 5
6 検査手順 ... 5
7 結果の判断と表現 ... 6
8 交差汚染防止対策 ... 7
付録A（参考）試薬の調製...8
付録B（参考）PCRのGEENBANK参照配列
鶏由来成分の増幅産物（1877 bp～2008 bp）…9
鶏肉成分の検出のためのPCR法
動物由来製品
1 範囲
この規格は、鶏の検出のためのPCR法を規定している。
動物由来製品に含まれる成分。
この規格は、鶏肉成分の定性検出に適用される。
動物由来製品。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の記載された文書については、日付が示されたバージョンのみが適用されます。
この文書にのみ適用されます。日付のない文書については、最新バージョン（
この規格には、すべての修正条項が適用されます。
GB 4789.1 国家食品安全基準 - 食品微生物学的
検査 - 一般的なガイドライン
GB/T 5009.1 食品衛生分析方法 - 物理的および化学的
セクション - 一般原則
GB/T 6682 分析実験室用水 - 仕様と試験
方法
GB/T 14699.1 飼料原料 - サンプリング
SN/T 1193 遺伝子検出および遺伝子検査のための研究室の一般要件
識別
3 試薬と材料
別途指定がない限り、試薬は分析試薬または生化学試薬である。
試薬; 実験用水はGB/T 6682の要件を満たしています。
3.1 鶏由来成分検出用プライマー（ペア）配列：
上流: 5'-ctataatcgataatccacgattca-3'
時々振って均一に混ぜます。12000 r/minで5分間遠心分離します。
上清を清潔な遠心管に移し、400μLの
クロロホルム/イソアミルアルコール（24:1）でよく混ぜ、12000 r/minで5分間遠心分離する。
上清を採取し、イソプロパノールの0.8倍量を加える。沈殿させる
12000 r/minで5分間遠心分離し、上澄み液を捨てます。75%
エタノールで一度すすぎ、自然乾燥させます。50μLの再蒸留水を加えます。
(ddH2O) を加えて沈殿物を溶解し、DNA 溶液を作ります。使用準備を行います。
サンプル DNA を抽出するために、同等の DNA 抽出キットを使用することもできます。
6.2 PCR増幅
反応システム：容量は25μLで、2XPCRバッファー12.5μL、5
dNTP（2 mmol/L）0.5 μL、プライマーペア（10 nmol/L）0.5 μL、DNA 1 μL
ポリメラーゼ（1 U/μL）、テンプレートDNA 5μL（100 ng ± 50 ng DNA）、
再蒸留水。
反応条件：PCR反応条件はPCRの種類によって若干異なります。
器具。94℃で1分～3分間の予備変性、
94 °Cで30秒～60秒、63 °Cで30秒～60秒のアニーリング、72 °Cで伸長
30秒～60秒、合計35サイクル、72℃で5分間伸長を行う。
4℃で保管してください。
検出プロセスでは、陽性コントロール、陰性コントロール、ブランクコントロールを設定します。
それぞれ制御します。
6.3 PCR増幅産物の電気泳動検出
1.5 g のアガロースを 100 mL の電気泳動緩衝液に量り入れ、完全に溶けるまで加熱します。
エチジウムブロマイドを最終濃度0.5μg/mLになるように加える。ゲルを準備する。
電気泳動バッファーを電気泳動タンクに注入し、液面が
ゲルを覆ったところ。PCR増幅産物8μLを3μLの
サンプルを添加したバッファーを加えます。サンプルを加えます。一定電圧を 9 V/cm に保ちます。
電気泳動を行い、ブロモフェノールブルー指示薬が
ゲルの中央。ゲルの下で電気泳動の結果を観察し記録する。
イメージャー。
6.4 シーケンス
電気泳動の結果が疑わしい陽性の場合、PCR増幅
製品は DNA 配列決定にかけられます。
7 結果の判断と表現
7.1 PCR増幅産物の電気泳動と配列分析