SN/T 1196-2012 영어 PDF (SNT1196-2012)

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SN/T 1196-2012: 유전자 변형 성분 검출 - 옥수수 시험 방법
일련번호 1196-2012
스엔
산업 표준
중화인민공화국의
SN/T 1196-2003 교체
유전자 변형 성분 검출 –
옥수수 시험 방법
발행일 2012년 12월 12일
2013년 7월 1일 구현
발행처. 국가품질감독검사검역총국
중화인민공화국의
목차
서문 ... 3
1 범위 ... 4
2 규범적 참조 ... 4
3 용어, 정의 및 약어 ... 5
4 오염 방지 대책 ... 6
5 샘플링 및 샘플 준비 ... 6
6 일반적인 PCR 방법 ... 6
7 실시간 형광 PCR 방법 ... 11
8 결과 기록 ... 16
9 결과의 표현 ... 16
부록 A ... 17
부록 B ... 21
참고문헌 ... 22
머리말
본 표준은 GB/T 1.1-2009에 명시된 규칙에 따라 작성되었습니다.
이 표준은 SN/T 1196-2003 "GMO 옥수수 정성적 PCR 검출 방법"을 대체합니다.
SN/T 1196-2003과 비교했을 때 이 표준의 주요 기술적 변경 사항은 다음과 같습니다.
다음과 같습니다.
- MIDOFY 표준의 중국어 및 영어 이름
- 옥수수 품종 식별 범위 추가, 유전학적 정성적 검출 수정
MON863, NK603, TC1507, MON88017, 59122, MIR604, MTR162의 수정된 라인
DBT418, MON89034, LY038, ES3272, Bt10 및 DP98140.
- ADD 2번째 방법 - 실시간 PCR 방법.
본 표준은 ISO 22001의 유전자 변형 옥수수의 PCR 검출 방법을 참조합니다.
표준 및 EU 공동 연구 센터 - GM을 위한 커뮤니티 참조 실험실
식품 및 사료 생명공학 및 GMOs 단위. 1번째 방법 - 일반적인 PCR 방법, ADD
유전자변형 MON863 NK603, TC1507, Bt10 계통의 정성적 검출.
ADD 2번째 방법 - 실시간 PCR 방법.
본 표준은 국가인증 및 공인기관에서 제안 및 관리합니다.
행정위원회.
이 표준의 초안 작성 기관. 랴오닝 출입국 검사 및 검역
중국 검열원 산둥 출입국 검사국
및 검역국, 복건성 출입국 검사 및 검역국,
심천시 출입국 검사검역국.
이 표준의 주요 초안 작성자. 조지주안, 쉬준이, 조신, 황신, 가오훙웨이,
Chen Wenbing, Yan Pingping, Ling Xingyuan, Shao Biying 및 Zhu Shuifang.
이 표준으로 대체된 이전 표준은 다음과 같습니다.
- 일련번호 1196-2003.
유전자 변형 성분 검출 –
옥수수 시험 방법
1 범위
본 표준은 PCR 방법 및 실시간 형광 PCR 방법을 규정합니다.
옥수수와 옥수수 가공 제품에서 유전자 변형 성분을 검출합니다.
본 표준의 스크리닝 검출은 유전학적으로 정성적인 검출에 적용됩니다.
옥수수와 옥수수 가공제품에 변형된 성분이 들어있음.
본 표준의 식별 검출은 유전학적으로 정성적인 검출에 적용됩니다.
옥수수 품종 MON810, Bt11, Bt176, T14/T25, CBH351, GA21의 변형된 구성 요소
MON863, NK603, TC1507, MON88017, 59122, MIR604, MIR162, DBT418, MON89034,
LY038, ES3272, Bt10 및 DP98140.
2 규범적 참조
이 문서의 적용을 위한 다음 문서는 필수입니다.
날짜가 있는 문서는 이 문서에 적용됩니다. 날짜가 없는 참조의 경우 최신
이 문서에는 개정판(모든 수정 사항 포함)이 적용됩니다.
GB/T 6682 분석 실험실 사용 - 사양 및 테스트 방법
GB/T 19495.1 유전자변형 생물체 및 그 파생 제품의 검출.
일반 요구 사항 및 정의
GB/T 19495.2 유전자변형생물체 및 그 유래 제품의 검출.
실험실에 대한 일반 요구 사항
GB/T 19495.3 유전자변형생물체 및 그 유래 제품의 검출.
핵산 추출
GB/T 19495.7 유전자변형생물체 및 그 유래 제품의 검출.
유전자칩 검출
6.2.15 10 X 로딩 버퍼. 0.25% 브로모페놀 블루, 40% 수크로스.
6.2.16 RNA 효소(10μg/mL).
6.2.17 UNG 효소(우라실 N-글리코실라제).
6.3 악기
솔리드 그라인더 및 모르타르; 고속 냉장 원심분리기; 데스크탑 미니 원심분리기, 미니
개별 원심분리기; 욕조 인큐베이터, 인큐베이터, 일정 온도 인큐베이터; 저울.
0.001g의 감도; 오토클레이브; 온도 오븐; 증류수 제조기 또는 이중 물
히터; 냉장고, 냉동고; 제빙기; 와류 발진기; 전자레인지; 사이클러;
전기영동; PCR 클린 벤치; 핵산 단백질 분석기; 미세피펫(0.1μL - 2μL,
0.5μL - 10μL, 2μL - 20μL, 10μL - 100μL, 20μL - 200μL, 200μL - 1000μL); 젤 이미징
시스템; 원심분리관. 1.5 mL - 5 mL; PCR 반응관. 200μL의 두 가지 사양,
500μL.
6.4 감지 단계
6.4.1 대비 설정
검출 중 대비는 GB/T 19495.2의 규정에 따라 설정되어야 합니다.
절차.
음성 타겟의 DNA 대조. 외인성 타겟의 DNA 단편을 포함하지 않아야 함
핵산 서열.
양성 대상의 DNA 대조. 참조 DNA이거나 추출된 DNA일 수 있습니다.
추적 가능한 참조 자료 또는 양성 샘플(또는 생물체)에서 추출한 DNA
알려진 시퀀스를 포함합니다.
증폭 시약의 대조. 테스트의 DNA 템플릿을 제외한 모든 반응 시약
샘플. 템플릿을 대체하기 위해 동일한 양의 물(핵산 제외)을 사용합니다.
PCR 반응 시스템의 DNA.
6.4.2 템플릿 DNA 추출
1g의 분말 샘플을 10mL 원심분리관에 넣고 CTAB 용해 완충액 5mL을 첨가합니다.
(적당한 양의 RNA 효소 포함); 잘 섞는다; 60ºC 수조에서 1분간 흔든다
7.4.7.2 Ct 값과 DNA 농도의 관계
Ct 값이 40 이상일 경우 타겟 DNA의 증폭은 일어나지 않는다.
PCR 과정; Ct 값이 36~40 사이이고, 각 값의 차이가 있는 경우
병렬 샘플이 매우 크면 대상 DNA의 양이 적다는 것을 나타냅니다.
PCR 반응 시스템은 템플릿 양을 적절히 늘려야 합니다.
7.5 실시간 형광 PCR 검출의 품질 관리
증폭 시약 대조제. 검출된 외인성 유전자의 Ct 값이 이상 또는
40과 같음; 내인성 유전자의 검출된 Ct 값이 40보다 크거나 같음.
음성 타겟 DNA 대조. 검출된 외인성 유전자의 Ct 값이 이상 또는
40과 같습니다.
양성 타겟 DNA 대조. 검출된 외인성 유전자의 Ct 값이 이보다 작거나 같음
34까지.
상기 지표 중 하나라도 미달하는 경우 실시간 재검사를 실시한다.
형광 PCR 증폭.
7.6 선별검사 및 식별검사의 선택
옥수수 샘플에서 유전자 변형 성분을 검출하기 위해서는 다음과 같은 방법을 사용할 수 있습니다.
부록 B의 내용에 따라 먼저 CaMV 35S, NOS를 SCREEN 및 TEST합니다.
NPTII, PAT, BAR 및 CryIA(b) 유전자의 경우 스크리닝 검사 결과가 음성인 경우 직접
테스트 결과를 보고하세요.
스크리닝 검사 결과가 양성인 경우, 추가적인 라인 식별 검출이 필요합니다.
MON810, Bt11, Bt176, T14/T25, CBH351, GA21, MON863, NK603의 특이성 유전자
TC1507, MON88017, 59122, MIR604, MIR162, DBT418, MON89034, LY038, ES3272,
Bt10과 DP98140을 이용하여 유전자변형 옥수수 계통을 확인하였다.
7.7 결과의 판단
검사 시료의 외인성 유전자 검출값 Ct가 40 이상인 경우,
검사 시료의 내인성 유전자 검출값 Ct는 24보다 작거나 같습니다.
그리고 설정 대조 결과가 정상이면 XXX 유전자가 아닌 것으로 판단할 수 있습니다.
참고문헌
[1] 마이오에스테르의 Bt11의 이벤트 특정 정량을 위한 프로토콜...