SN/T 1201-2014 영어 PDF (SNT1201-2014)

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SN/T 1201-2014: 사료 중 유전자 변형 식물 성분 검출을 위한 PCR 프로토콜
일련번호 1201-2014
출입국 검사 및 검역 산업
중화인민공화국 표준
SN/T 1201-2003 교체
유전자 변형 식물 검출을 위한 PCR 프로토콜
사료의 성분
발행일: 2014년 11월 19일
구현일: 2015년 5월 1일
발행처: 국가품질감독검사총국
PRC 검역
목차
서문 ... 3
1 범위 ... 4
2 규범적 참조 ... 4
3 용어, 정의, 약어 ... 4
4가지 원칙...7
5 주요 장비 및 시약 ... 7
6 오염방지대책 ... 13
7 샘플링 및 샘플 준비 ... 13
8 검사 단계 ... 13
9 결과 판단 및 발표 ... 16
10 샘플 보관 ... 17
유전자 변형 식물 검출을 위한 PCR 프로토콜
사료의 성분
1 범위
본 표준은 다음을 위한 정성적 실시간 형광 PCR 검출 방법을 지정합니다.
사료에 첨가되는 형질전환 식물 성분.
본 표준은 유전자변형식물의 정성적 검출에 적용 가능합니다.
사료용 대두, 옥수수, 쌀, 유채, 면화, 루세른, 밀 등과 같은 성분
관련된 라인의 식별.
이 표준은 유전자 변형 제품의 정성적 검출에도 적용됩니다.
가용성을 지닌 증류 건조 곡물의 성분 및 관련 성분의 식별
윤곽.
2 규범적 참조
다음 문서는 이 문서의 적용에 필수적입니다. 날짜가 지정된 문서의 경우
문서의 경우, 표시된 날짜가 있는 버전만 이 문서에 적용됩니다.
날짜가 없는 문서의 경우 최신 버전(모든 수정 사항 포함)만 해당됩니다.
이 표준에 적용됩니다.
GB/T 6682 분석 실험실용 물 - 사양 및 테스트 방법
GB/T 19495.2 유전자 변형 생물체 및 유래 제품의 검출 -
실험실에 대한 일반 요구 사항
GB/T 19495.7 유전자 변형 생물체 및 유래 제품의 검출 -
샘플링 및 샘플 준비 방법
3 용어, 정의, 약어
3.1 용어 및 정의
이 문서에는 다음과 같은 용어와 정의가 적용됩니다.
3.1.1
밥을 먹이다
모든 사람이 키우는 동물의 음식에 대한 일반적인 용어입니다.
좁은 의미의 사료는 주로 사육되는 동물의 먹이를 말합니다.
농업이나 축산.
3.1.2
실시간 형광 중합효소 연쇄 반응
형광 그룹은 중합효소 연쇄 반응 시스템에 추가되어 전체
PCR 과정은 형광 신호의 축적을 통해 실시간으로 모니터링됩니다.
형광 신호의 강도는 템플릿의 수를 직접적으로 반영합니다.
3.2 약어
이 문서에는 다음 약어가 적용됩니다.
Acp1: 산성 인산가수분해효소 1
BAR: 포스피노트리신 아세틸트랜스퍼라제 유전자
BnACCg8: 아세틸-CoA 카복실화효소 유전자
bp: 염기쌍
Btc: 형질전환 벼 TT51-1 및 Bt shanyou의 구조 특이적 DNA 서열
63
CaMV35S: 콜리플라워 모자이크 바이러스의 35S 프로모터
CP4-EPSPS: 5-에놀피루빌시키메이트-3-인산 합성효소 유전자
CryIA(b): Bacillus thuringiensis subsp. [합성 유전자]의 cryIA(b) 유전자
첫 번째 648개 아미노산을 인코딩하고 살충 활성이 있는 절단된 제품은 다음과 동일합니다.
[b) Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki steam HD-1의 cryIA 유전자의 경우]
CryIA(c): Bacillus thuringiensis의 cryIA(c) 유전자[합성 유전자로 인코딩됨]
29~613 아미노산, 살충 활성이 있는 절단된 제품은 다음과 같습니다.
[바실러스 투린지엔시스의 cryIA (c) 유전자]
CryIA(b)/CryIA(c): 바실러스 투린지엔시스 살충단백질 cryIA의 융합 유전자
(b) 그리고 cryIA (c)
Ct 값 : 각 반응관에서 형광 신호가 발생하는 사이클 수
설정된 임계값(주기 임계값)에 도달하면 통과합니다.
CTAB: 세틸트리틸암모늄브로마이드
dATP: 데옥시아데노신 삼인산
4가지 원칙
실시간 형광 정량 PCR 기술은
형광성 그룹의 PCR 반응 시스템에 형광성 그룹의 축적을 사용하여
PCR 프로세스 전체를 실시간으로 모니터링하고 최종적으로 정량적으로 분석하기 위한 신호
표준 곡선을 통해 알려지지 않은 템플릿을 찾습니다.
PCR 증폭 동안 특정 형광 프로브가 동시에 추가됩니다.
프라이머 쌍. 프로브는 올리고뉴클레오타이드입니다. 두 끝은 각각 레이블이 지정됩니다.
리포터 형광 그룹과 퀀칭 형광 그룹이 있습니다. 프로브가
손상되지 않은 경우 리포터 유전자에서 방출되는 형광 신호가 흡수됩니다.
형광 그룹을 소광합니다. PCR 증폭 동안 5'-3' 엑소뉴클레아제 활동
Taq 효소는 프로브를 절단하고 분해하여 리포터 형광 그룹을 만듭니다.
형광 억제 그룹과 분리되어 형광 모니터링이 가능합니다.
시스템은 형광 신호를 수신할 수 있습니다. 즉, 형광 분자가 형성됩니다.
DNA 사슬이 증폭되는 시간; 이를 통해 완전한 동기화가 달성됩니다.
형광 신호의 축적과 PCR 형성 사이
제품.
5 주요 장비 및 시약
5.1 주요 장비
실시간 형광 PCR 장비, 제빙기, 핵산단백질 분석기 또는 UV
분광광도계, 항온수조, 원심분리기, 박격포 및 분쇄
장치, 교반기, 미세피펫(2.5 μL, 20 μL, 200 μL, 1000 μL).
5.2 주요 시약
달리 명시되지 않는 한 모든 테스트에 사용되는 시약의 등급은 분석 등급이어야 합니다.
DNA와 DNase를 포함하지 않는 순수 또는 생화학적 시약. 사용된 물
시험에서는 GB/T 6682의 1등급 물의 사양을 충족해야 합니다. 모든 시약은
DNase에 의해 오염된 용기에 포장되어야 합니다.
5.2.1 CTAB 추출물: 20 g/L CTAB, 1.4 mol/L NaCL, 0.1 mol/L Tris-HCL, 0.02 mol/L
Na2-EDTA, pH 8.0.
5.2.2 CTAB 침전 용액: 5 g/L CTAB, 40 mmol/L NaCl.
5.2.3 단백질 분해효소 K 용액: 20 mg/mL.
5.2.4 RNase A: 100 mg/mL.
5.2.5 NaCl 용액: 1.2 mol/L.
사료의 종류는 다양하고 성분도 매우 복잡하다.
다양한 식물성 성분, 단백질 가루와 같은 다양한 프리믹스도 포함될 수 있습니다.
뼈가루, 아미노산, 비타민, 항생제(또는 수의용 약물), 미네랄, 항진균제
에이전트, 방충제, 착색제, 조미료, 결합제, 발효 제품. 이러한
사료 샘플의 소금, 설탕, 색소 및 기타 화학 물질은 영향을 미칩니다.
이후 게놈 DNA 추출; 이는 이후의 PCR 반응을 억제할 수도 있습니다.
등등. 세척 및 기타 방법을 통해 제거해야 합니다. 분쇄된 것을 200mg 복용합니다.
샘플을 공급하고 2mL 원심분리관에 넣습니다. 이중 증류수 1.5mL를 첨가합니다.
뒤집어서 섞는다. 12000g에서 5분간 원심분리한다.
상층액; 침전물에 1.5 mL의 이중 증류수를 첨가합니다. 위의 과정을 반복합니다.
세척 과정을 3~5회 반복합니다. 최종 침전물은 게놈 추출에 사용됩니다.
DNA.
8.2 DNA 추출
8.2.1 CTAB 방법
CTAB 추출 방법은 다음과 같습니다.
a) CTAB 추출 완충액 1000 μL와 단백질 분해효소 K 용액 2 μL를 첨가합니다.
위의 200mg 전처리된 샘플을 65°C에서 60분간 배양합니다. 반전시키고
이 기간 동안 3~5회 혼합합니다. 또는 65°C에서 밤새도록 배양합니다. 원심분리기
12000g에서 10분간 방치합니다. 상층액을 다른 깨끗한 2mL 원심분리기로 옮깁니다.
튜브.
b) 상층액과 같은 양의 클로로포름을 첨가합니다. 뒤집어서 섞습니다.
12000g에서 10분간 원심분리한다. 상층액을 다른 2mL로 옮긴다.