SN/T 2978-2011 영어 PDF (SNT2978-2011)

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SN/T 2978-2011: 동물성 제품의 닭고기 성분 검출을 위한 PCR 방법
일련번호 2978-2011
스엔
출입국 검사 및 검역 산업
중화인민공화국 표준
닭고기 성분 검출을 위한 PCR 방법
동물성 제품
발행일: 2011년 9월 9일
구현일: 2012년 4월 1일
발행처: 국가품질감독검사총국
PRC 검역
목차
서문 ... 3
1 범위 ... 4
2 규범적 참조 ... 4
3 시약 및 재료 ... 4
4 장비 ... 5
5 시료의 선정 및 준비 ... 5
6 검사 단계 ... 5
7 판단 및 결과 표현 ... 6
8 교차오염 방지를 위한 조치 ... 7
부록 A (정보) 시약 준비 ... 8
부록 B (정보) PCR의 GEENBANK 참조 시퀀스
닭 유래 성분의 증폭산물(1877bp ~ 2008bp) ... 9
닭고기 성분 검출을 위한 PCR 방법
동물성 제품
1 범위
본 표준은 닭의 검출을 위한 PCR 방법을 규정한다.
동물성 제품의 성분.
본 표준은 닭고기 성분의 정성적 검출에 적용됩니다.
동물성 제품
2 규범적 참조
다음 문서는 이 문서의 적용에 필수적입니다.
날짜가 표시된 문서의 경우 해당 날짜가 표시된 버전만 적용됩니다.
이 문서에; 날짜가 없는 문서의 경우 최신 버전만(다음을 포함함)
(모든 개정 내용)이 이 표준에 적용됩니다.
GB 4789.1 국가식품안전기준 - 식품미생물학
시험 - 일반 지침
GB/T 5009.1 식품 위생 분석 방법 - 물리적 및 화학적
섹션 - 일반 원칙
GB/T 6682 분석 실험실용 물 - 사양 및 테스트
행동 양식
GB/T 14699.1 사료 공급 - 샘플링
SN/T 1193 유전자 검출 및 실험실에 대한 일반 요구 사항
신분증
3 시약 및 재료
달리 명시되지 않는 한, 시약은 분석 시약 또는 생화학 시약입니다.
시약; 실험용 물은 GB/T 6682의 요구사항을 충족합니다.
3.1 닭고기 유래 성분 검출을 위한 프라이머(쌍) 시퀀스:
상류: 5'-ctataatcgataatccacgattca-3'
때때로 흔들어서 균일하게 섞는다. 12000 r/min에서 5분간 원심분리한다.
분. 상층액을 깨끗한 원심분리관으로 옮깁니다. 400 μL를 추가합니다.
클로로포름/이소아밀알코올(24:1)을 넣고 잘 섞는다. 12000r/min으로 5분간 원심분리한다.
분. 상층액을 취한다. 이소프로판올의 0.8배 부피를 첨가한다. 침전
그것. 12000 r/min에서 5분간 원심분리합니다. 상층액을 버립니다. 75%를 사용합니다.
에탄올로 한번 헹군다. 자연건조한다. 2차 증류수 50 μL를 더한다.
(ddH2O), 침전물을 용해하여 DNA 용액을 만듭니다. 사용을 준비합니다.
또한, 샘플 DNA를 추출하기 위해 동등한 DNA 추출 키트를 사용할 수도 있습니다.
6.2 PCR 증폭
반응 시스템: 용량은 25 μL이며 여기에는 2 X PCR 완충액 12.5 μL, 5 μL가 포함됩니다.
dNTP(2mmol/L) μL, 프라이머 쌍(10nmol/L) 0.5 μL, DNA 1 μL
중합효소(1 U/μL), 5 μL의 템플릿 DNA(100 ng ± 50 ng DNA), 0.5 μL의
이중 증류수.
반응 조건 : PCR 반응 조건은 PCR 종류에 따라 약간씩 다릅니다.
기구. 94 °C에서 1분 ~ 3분 동안 사전 변성을 수행합니다. 변성
94 °C에서 30초 ~ 60초, 63 °C에서 30초 ~ 60초 동안 어닐링, 72 °C에서 연장
30초 ~ 60초 동안, 총 35 사이클; 72 °C에서 5분간 연장 수행;
4°C에서 보관하세요.
검출과정에서 양성대조군, 음성대조군, 공백대조군을 설정한다.
각각 제어합니다.
6.3 PCR 증폭산물의 전기영동 검출
100ml의 전기영동 완충액에 1.5g의 아가로스를 달아서 완전히 녹일 때까지 가열합니다.
에티듐 브로마이드를 최종 농도 0.5 μg/mL로 첨가합니다. 겔을 준비합니다. 첨가합니다.
전기영동 완충액을 전기영동 탱크에 넣어 액체 수위를
방금 젤을 덮었습니다. PCR의 증폭된 각 생성물 8 μL를 3 μL와 섞습니다.
샘플을 추가한 버퍼. 샘플을 적용합니다. 9 V/cm에서 일정한 전압을 유지합니다.
브로모페놀 블루 지시약이 이동할 때까지 전기영동을 수행합니다.
젤의 중간. 젤 아래에서 전기영동 결과를 관찰하고 기록합니다.
이미저.
6.4 시퀀싱
전기영동 결과가 의심스럽게 양성인 경우 PCR 증폭
제품은 DNA 시퀀싱을 거칩니다.
7. 판단 및 결과 표현
7.1 PCR 증폭산물의 전기영동 및 염기서열 분석