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YY/T 1465.1-2016: Immunogenes Bewertungsverfahren für Medizinprodukte. Teil 1: T-Lymphozyten-Transformationstest in vitro
JJ/T 1465.1-2016
JJ
PHARMAZEUTISCHER INDUSTRIESTANDARD
DER VOLKSREPUBLIK CHINA
ICS 11.040.01
C 30
Immunogene Bewertungsmethode für Medizinprodukte -
Teil 1. T-Lymphozyten-Transformationstest in vitro
AUSGESTELLT AM 26. JANUAR 2016
IMPLEMENTIERT AM 01. JANUAR 2017
Herausgegeben von der chinesischen Lebensmittel- und Arzneimittelbehörde
Inhaltsverzeichnis
Vorwort ... 3
Einführung ... 4
1 Geltungsbereich ... 5
2 Normative Verweisungen ... 5
3 Begriffe und Definitionen ... 5
4 Abkürzung ... 5
5 Versuchstier ... 6
6 Probenvorbereitung ... 6
7 MTT-Methode ... 7
8 CFSE-Methode ... 8
9 Testbericht ... 9
Literaturverzeichnis ... 10
Immunogene Bewertungsmethode für Medizinprodukte -
Teil 1. T-Lymphozyten-Transformationstest in vitro
1 Geltungsbereich
Dieser Teil beschreibt die MTT-Methode und die CFSE-Methode für die T-Lymphozyten
Transformationstest in vitro; er ist anwendbar zur Beurteilung der Wirkung von medizinischen
Geräte/Materialien zur Immunfunktion der T-Lymphozyten.
2 Normative Verweisungen
Die folgenden Dokumente sind für die Anwendung dieses Dokuments erforderlich. Für die
datierte Dokumente, sind für diese nur die Versionen mit den angegebenen Daten gültig
Dokument; bei undatierten Dokumenten wird nur die neueste Version (einschließlich aller
Änderungen) sind auf dieses Dokument anwendbar.
GB/T 16886.1 Biologische Bewertung von Medizinprodukten - Teil 1. Bewertung und
Testen
GB/T 16886.2 Biologische Bewertung von Medizinprodukten - Teil 2. Tierschutz
Anforderungen
GB/T 16886.12 Biologische Bewertung von Medizinprodukten - Teil 12. Beispiel
Vorbereitung und Referenzmaterialien
GB/T 16886.20 Biologische Bewertung von Medizinprodukten - Teil 20. Grundsätze und
Methoden zur immuntoxikologischen Prüfung von Medizinprodukten
3 Begriffe und Definitionen
Für die Zwecke dieses Dokuments gelten die in GB/T 16886.1 angegebenen Begriffe und Definitionen.
und GB/T 16886.20 gelten.
4 Abkürzung
Die folgenden Abkürzungen gelten für dieses Dokument.
HINWEIS: Die Immunogene, die in den medizinischen Geräten/Materialien vorhanden sein können, sind meist
makromolekulare Substanzen; daher ist die Wirksamkeit der Herstellungsmethode für die
Ausgewählte Prüflinge sollen erläutert werden.
7 MTT-Methode
7.1 Grundsatz
MTT ist ein blassgelber Zellfarbstoff; er dringt in die lebenden Zellen ein und bildet wasserunlösliche
blau-violette kristalline Formazanpartikel in Mitochondrien unter der Rolle von Succinat
Dehydrogenase und Ablagerungen in den Zellen; lösen das Formazan in den Zellen auf und
Bestimmen Sie den Absorptionswert durch einen Enzymimmunoassay. Dann
kann indirekt die Anzahl und/oder Stoffwechselaktivität der lebenden Zellen widerspiegeln.
Stimuliert durch ein Antigen oder Mitogen können die Lymphozyten eine spezifische oder nicht-
spezifische Immunantwort, proliferieren und differenzieren; die Anzahl oder metabolische
Die Aktivität der Zellen kann zunehmen. Untersuchen Sie die Fähigkeit der Lymphozyten, sich zu vermehren, indem Sie
MTT-Farbstoffe, dann kann es die Auswirkungen von Immunogenen in der medizinischen
Geräte/Materialien zur Immunfunktion der Lymphozyten.
ANMERKUNG 1. MTT ist ein häufig verwendeter Färbemarker zur Erkennung der Zellproliferation. Andere
Geeignete Färbemarker wie BrdU, MTS und CCK-8 können ebenfalls verwendet werden. 3H-TdR ist ein hoch
Marker zur Erkennung der Zellproliferation; das Labor, das ihn verwenden soll, muss jedoch über die
Die Qualifikation zum Umgang mit radioaktiven Stoffen muss gegeben sein und das Prüfpersonal muss geschult und qualifiziert sein.
NTOE 2. Diese Methode eignet sich zum Nachweis der Proliferation von T-Lymphozyten in vitro;
nicht ausschließen, dass die Proliferation anderer Zelltypen die Ergebnisse der
dieses Experiment.
7.2 Lymphozytenpräparation
Die BALB/c-Mäuse wurden getötet, indem man ihnen die Halswirbel entfernte; die Einzeller
Die Suspension wurde durch Mahlen hergestellt; die Zellsuspension wurde gesammelt; 400 g wurden
5 Minuten zentrifugieren, Überstand ablassen, 5 ml Erythrozytenlysat zugeben, mischen
auf, inkubieren bei 4°C für 5min, zugeben RPMI1640 Nährlösung mit 10% FCS zu
Reaktion stoppen; 400 g nehmen und 5 Minuten zentrifugieren; Überstand ablassen; hinzufügen
RPMI1640 Nährlösung mit 10% FCS zur Einstellung der Zellkonzentration in
2×106 Zellen/ml.
7.3 Testgruppierung
a) Kontrollgruppe für Zellnährlösung (Blindkontrolle);
b) Negative Kontrollgruppe (Zellkontrolle);
c) Positive Kontrollgruppe (Zelle + ConA, 5 µg/ml);