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YY/T 1465.1-2016 : Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux. Partie 1 : Test de transformation des lymphocytes T in vitro
AA/T 1465.1-2016
Oui
NORME DE L'INDUSTRIE PHARMACEUTIQUE
DE LA RÉPUBLIQUE POPULAIRE DE CHINE
ICS 11.040.01
C 30
Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux -
Partie 1. Test de transformation des lymphocytes T in vitro
PUBLIÉ LE 26 JANVIER 2016
Mis en œuvre le 1er janvier 2017
Publié par l'Administration chinoise des produits alimentaires et pharmaceutiques
Table des matières
Avant-propos ... 3
Présentation ... 4
1 Portée ... 5
2 Références normatives ... 5
3 Termes et définitions ... 5
4 Abréviation ... 5
5 Animaux d'essai... 6
6 Préparation des échantillons ... 6
7 Méthode MTT ... 7
8 Méthode CFSE ... 8
9 Rapport d'essai ... 9
Bibliographie ... 10
Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux -
Partie 1. Test de transformation des lymphocytes T in vitro
1 Portée
Cette partie donne la méthode MTT et la méthode CFSE pour les lymphocytes T
test de transformation in vitro ; il est applicable pour évaluer l'effet des médicaments
dispositifs/matériaux sur la fonction immunitaire des lymphocytes T.
2 Références normatives
Les documents suivants sont indispensables à l'application du présent document. Pour la
documents datés, seules les versions avec les dates indiquées sont applicables à ce
document ; pour les documents non datés, seule la dernière version (comprenant toutes les
(amendements) sont applicables au présent document.
GB/T 16886.1 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 1. Évaluation et
Essai
GB/T 16886.2 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 2. Bien-être animal
Exigences
GB/T 16886.12 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 12. Exemple
Préparation et matériel de référence
GB/T 16886.20 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 20. Principes et
Méthodes de test d'immunotoxicologie des dispositifs médicaux
3 Termes et définitions
Aux fins du présent document, les termes et définitions donnés dans la norme GB/T 16886.1
et GB/T 16886.20 s'appliquent.
4 Abréviation
Les abréviations suivantes s’appliquent à ce document.
REMARQUE. Les immunogènes qui peuvent être présents dans les dispositifs/matériaux médicaux sont principalement
substances macromoléculaires ; par conséquent, l'efficacité de la méthode de préparation pour la
les échantillons d'essai sélectionnés doivent être expliqués.
Méthode 7 MTT
7.1 Principe
Le MTT est un colorant cellulaire jaune pâle ; il pénètre dans les cellules vivantes et forme des molécules insolubles dans l'eau.
particules cristallines de formazan bleu-violet dans les mitochondries sous le rôle du succinate
déshydrogénase et dépôts dans les cellules ; dissoudre le formazan dans les cellules, et
déterminer sa valeur d'absorption par un test immuno-enzymatique ; puis il
peut refléter indirectement le nombre et/ou l'activité métabolique des cellules vivantes. Lorsque
stimulés par un antigène ou un mitogène, les lymphocytes peuvent subir une réaction spécifique ou non
réponse immunitaire spécifique, proliférer et se différencier ; le nombre ou le métabolisme
l'activité des cellules peut augmenter. Inspectez la capacité des lymphocytes à proliférer en
Les colorants MTT peuvent alors refléter les effets des immunogènes dans le domaine médical
dispositifs/matériaux sur la fonction immunitaire des lymphocytes.
REMARQUE 1. Le MTT est un marqueur de coloration couramment utilisé pour détecter la prolifération cellulaire. Autre
Des marqueurs de coloration appropriés tels que BrdU, MTS et CCK-8 peuvent également être utilisés. Le 3H-TdR est un
marqueur sensible pour détecter la prolifération cellulaire ; mais le laboratoire qui l'utilise doit avoir les
la qualification pour l'utilisation des matières radioactives et le personnel chargé des essais doivent être formés et qualifiés.
NTOE 2. Cette méthode est adaptée à la détection de la prolifération des lymphocytes T in vitro ;
n'exclut pas l'interférence de la prolifération d'autres types de sous-ensembles cellulaires sur les résultats de
cette expérience.
7.2 Préparation des lymphocytes
Les souris BALB/c ont été sacrifiées en retirant les vertèbres cervicales ; la cellule unique
la suspension a été préparée par broyage ; recueillir la suspension cellulaire ; prendre 400 g pour
centrifuger pendant 5 min ; évacuer le surnageant ; ajouter 5 ml de lysat de globules rouges ; mélanger
en haut ; incuber à 4°C pendant 5 min ; ajouter la solution nutritive RPMI1640 contenant 10 % de FCS à
arrêter la réaction ; prendre 400 g pour centrifuger pendant 5 min ; évacuer le surnageant ; ajouter
Solution nutritive RPMI1640 contenant 10 % de FCS pour ajuster la concentration cellulaire en
2×106 cellules/mL.
7.3 Regroupement des tests
a) Groupe témoin pour la solution nutritive cellulaire (témoin blanc) ;
b) Groupe témoin négatif (témoin cellulaire) ;
c) Groupe témoin positif (cellule + ConA, 5 µg/mL) ;