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YY/T 1465.3-2016 : Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux - Partie 3 : Dosage des cellules formant des plaques - Méthode en phase solide sur gel d'agar
AA/T 1465.3-2016
Oui
NORME DE L'INDUSTRIE PHARMACEUTIQUE
DE LA RÉPUBLIQUE POPULAIRE DE CHINE
ICS 11.040.01
C 30
Méthode d’évaluation immunogène des dispositifs médicaux – Partie 3 :
Dosage des cellules formant des plaques – Méthode en phase solide sur gel d'agar
PUBLIÉ LE : 29 JUILLET 2016
Mis en œuvre le : 1er juin 2017
Publié par : China Food and Drug Administration
Table des matières
Avant-propos ... 3
Présentation ... 4
1 Portée ... 5
2 Références normatives ... 5
3 Termes et définitions ... 5
4 Principe de test ... 6
5 Animaux de laboratoire... 6
6 Préparation des échantillons et voies d'exposition ... 6
7 Sélection des échantillons de contrôle ... 7
8 Procédures de test ... 7
9 Calcul des résultats ... 8
10 Jugement du résultat ... 9
11 Contrôle de fiabilité ... 9
12 Rapport d'essai ... 9
Bibliographie ... 11
Méthode d’évaluation immunogène des dispositifs médicaux – Partie 3 :
Dosage des cellules formant des plaques – Méthode en phase solide sur gel d'agar
1 Portée
La présente partie de la norme YY/T 1465 fournit une méthode de détermination des cellules formant des plaques par
méthode en phase solide sur gel d'agar.
Cette partie est adaptée à l'évaluation de l'impact des dispositifs/matériaux médicaux sur l'organisme.
fonction immunitaire humorale.
2 Références normatives
Les documents suivants sont indispensables à l'application du présent document. Pour la date
documents, seules les versions avec les dates indiquées sont applicables au présent Document ; pour la
documents non datés, seule la dernière version (comprenant toutes les modifications) est applicable à ce document
Document.
GB/T 16886.1 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 1 : Évaluation et essais
dans le cadre d'un processus de gestion des risques (GB/T 16886.2-2011, ISO 10993-1:2009, IDT)
GB/T 16886.2 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 2 : Bien-être animal
exigences (GB/T 16886.2-2011, ISO 10993-2:2006, IDT)
GB/T 16886.11 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 11 : Essais de toxicité systémique
toxicité (GB/T 16886.11-2011, ISO 10993-6:2006, IDT)
GB/T 16886.12 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 12 : Préparation des échantillons
et matériaux de référence (GB/T 16886.12-2005, ISO 10993-12:2002, IDT)
GB/T 16886.20 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 20 : Principes et méthodes
pour les tests d'immunotoxicologie des dispositifs médicaux (GB/T 16886.20-2015, ISO/TS 10993-
20:2006, IDT)
3 Termes et définitions
Aux fins du présent document, les termes et définitions donnés dans GB/T 16886.1, GB/T
16886.2, GB/T 16886.12 et GB/T 16886.20 s'appliquent.
4 Principe de test
Après avoir sensibilisé des souris avec des globules rouges de mouton (SRBC), des lymphocytes B (plasmocytes)
capables de produire des anticorps anti-SRBC apparaîtront dans les organes immunitaires des souris,
en particulier la rate. Le nombre et la fonction de ces cellules peuvent refléter l'état de santé du corps.
fonction immunitaire humorale. Lorsque ces cellules qui peuvent sécréter des anticorps anti-SRBC sont
incubés avec des globules rouges, les anticorps libérés se lieront aux globules rouges pour former un antigène-anticorps
complexes. Avec la participation du complément, les SRBC autour de ces lymphocytes B vont
se dissout et la plaque apparaît. Lorsque des dispositifs/matériaux médicaux agissent sur le corps humain,
l'impact des dispositifs/matériaux médicaux sur la fonction immunitaire humorale du corps peut être évalué
en détectant les changements dans le nombre de ces cellules formant des plaques.
5 animaux de laboratoire
5.1 Sélection des espèces animales
Les espèces animales sélectionnées pour ce test sont les souris, quel que soit leur sexe. Les souris BalD/c sont les
souche préférée. Il convient d'utiliser des souris nullipares adultes et non enceintes pesant
18 g à 22 g. Au début du test, la différence de poids corporel des animaux doit être minime
et ne pas dépasser ± 20 % du poids corporel moyen.
5.2 Préparation des animaux
Tous les tests sur les animaux doivent être effectués dans des laboratoires agréés par les agences nationales d'accréditation.
et en conformité avec toutes les réglementations applicables en matière de bien-être des animaux de laboratoire ; et doit répondre
les exigences de la norme GB/T 16886.2. Les animaux d'essai sont sélectionnés au hasard, marqués individuellement,
et s'adapter aux conditions de laboratoire pendant au moins 5 jours avant le test.
6 Préparation des échantillons et voies d'exposition
6.1 Pour les substances insolubles non dégradables courantes dans les dispositifs médicaux, des extraits d'échantillons peuvent
être préparé conformément aux principes de GB/T 16886.12. Un solvant approprié doit être utilisé pour
extraction rigoureuse pour dissoudre tous les composants extractibles. Les extraits doivent être préparés sur
le jour même, sauf si des données de stabilité sont disponibles pour démontrer l'acceptabilité du stockage.
à l'utilisation prévue de l'échantillon, reportez-vous aux exigences de la norme GB/T 16886.11 pour déterminer la
Mode de contact avec les animaux de l'échantillon/extrait. Les méthodes de contact avec les animaux couramment utilisées comprennent
administration intragastrique, injection intrapéritonéale et injection intraveineuse. L'exposition
la dose et la durée d'exposition peuvent être conçues en fonction des exigences de toxicité aiguë, subaiguë,
tests de toxicité systémique subchronique et chronique dans GB/T 16886.11, et doivent être indiqués dans le
rapport de test final.
6.2 Pour les dispositifs médicaux dégradables, la méthode de contact entre le dispositif et les animaux doit
REMARQUE : La dilution graduelle du matériau ou de son extrait aidera à dériver la relation dose-effet de
la réponse immunitaire. Il est recommandé de tester le groupe d'échantillons avec des doses différentes.
8.2 Contact pour l'échantillon et le contrôle
Les animaux de chaque groupe d'essai sont exposés à des échantillons en fonction de la dose, de la voie et de la
période. Les animaux du groupe témoin négatif sont exposés à la substance témoin négative
(milieu d'extraction) de la même manière.
8.3 Immunisation SRBC
Au début du test principal, les souris du groupe d'échantillons du test immunitaire, groupe témoin négatif
et le groupe témoin positif reçoivent une injection intrapéritonéale de 2 % de SRBC (fraction volumique), 0,2
mL/souris. Dans le même temps, les animaux du groupe témoin positif reçoivent une injection par voie intrapéritonéale.
Les animaux sont sacrifiés le 4ème jour après l'injection de SRBC pour des tests.
8.4 Préparation de la suspension de cellules spléniques
Après immunisation avec SRBC, les souris sont sacrifiées et leurs rates sont immédiatement
disséqué et placé dans un bain de glace. Un peu de solution de Hank est ajouté et une suspension de cellules de rate
est préparé à l'aide d'un filet en nylon de 200 mesh. Utilisez un milieu de culture sans sérum ou la solution de Hank
pour préparer la suspension de cellules spléniques obtenue à 5×106 cellules/mL ; utiliser une coloration au bleu trypan à 0,5 %
d'observer que le nombre de cellules viables doit être supérieur à 90 %.
8.5 Préparation de l'agarose
Préparez 1% d'agarose ; mélangez-le avec une quantité égale de solution de Hank avec 2 fois la
concentration ; autoclavez-le à 121°C pendant 30 min. Et répartissez-le dans de petits tubes à essai qui sont
isolé dans un bain-marie à 45°C ~ 50°C ; 2 mL par tube à essai.
8.6 Numérations de cellules mixtes et formant des plaques
Ajouter 0,2 mL de SRBC à 10 % (fraction volumique, préparée avec un tampon SA) et 0,1 mL de rate
suspension cellulaire (5 × 106 cellules/mL) dans chaque petit tube à essai ; mélanger rapidement et verser dans un récipient de 35 mm
plaque en plastique de diamètre. Préparer 3 échantillons parallèles pour chaque animal. Après coagulation, placer le
Placer la plaque dans un incubateur à 37°C, 5% CO2 et laisser incuber pendant 1,5 h. Ajouter ensuite le complément (1:8~1:15)
dilué avec du tampon SA à la surface de la plaque ; continuer à incuber pendant 1,5 h ; et compter les
nombre de plaques hémolytiques.
REMARQUE : Si vous devez conserver les résultats, ajoutez 6 ml de glutaraldéhyde à 0,25 % préparé avec des solutions physiologiques.
solution saline ou PBS sur la plaque pour la fixation.
9 Calcul des résultats
9.1 Exprimez les résultats comme le nombre de cellules formant des plaques pour 106 cellules de la rate.
9.2 Au moins 3 plaques d'agar doivent être préparées pour chaque animal ; la moyenne et l'écart type de
cellules formant des plaques de...