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YY/T 1465.5-2016 : Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux - Partie 5 : Détermination de la clairance de l'antigène α-Gal dans les dispositifs médicaux utilisant des tissus animaux et leurs dérivés avec l'anticorps M86
AA/T 1465.5-2016
Oui
NORME DE L'INDUSTRIE PHARMACEUTIQUE
DE LA RÉPUBLIQUE POPULAIRE DE CHINE
ICS 11.120.20
C 30
Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux - Partie 5 :
Détermination de la clairance de l'antigène α-Gal dans les dispositifs médicaux
utilisation de tissus animaux et de leurs dérivés avec M86
anticorps
PUBLIÉ LE : 29 JUILLET 2016
Mis en œuvre le : 01 juin 2017
Publié par : China Food and Drug Administration.
Table des matières
Avant-propos ... 3
Présentation ... 4
1 Dispositions générales ... 5
2 Références normatives ... 5
3 Termes et définitions ... 6
4 Principe de test ... 6
5 Réactifs et instruments ... 6
6 étapes de test ... 6
7 Analyse des données ... 9
8 Rapport d'essai ... 10
Annexe A (informative) Exemple de détermination du taux de clairance de l'antigène α-Gal dans
produits à base de peau de porc hydrolysés enzymatiquement par immunohistochimie ... 11
Annexe B (informative) Exemple de traitement d'échantillons ... 14
Références ... 16
Méthode d'évaluation immunogène des dispositifs médicaux - Partie 5 :
Détermination de la clairance de l'antigène α-Gal dans les dispositifs médicaux
utilisation de tissus animaux et de leurs dérivés avec M86
anticorps
1 Dispositions générales
La présente partie de la norme YY/T 1465 fournit une méthode permettant de déterminer le taux de clairance de l'α-Gal
antigène dans les dispositifs médicaux d'origine animale, qui convient à l'évaluation de la
efficacité du processus de clairance de l'antigène α-Gal.
La méthode décrite dans cette partie s'applique aux matériaux qui peuvent exposer entièrement l'antigène α-Gal
par broyage. Si l'antigène α-Gal ne peut pas être entièrement exposé par broyage, d'autres
des méthodes adaptées confirmées peuvent être envisagées.
Remarque : L’annexe A donne des exemples de méthodes d’évaluation par immunohistochimie.
2 Références normatives
Les documents suivants sont indispensables à l'application du présent document. Pour la date
documents, seules les versions portant les dates indiquées sont applicables à ce document ;
pour les documents non datés, seule la dernière version (comprenant toutes les modifications) est
applicables à cette norme.
GB/T 16886.2 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 2 : Bien-être animal
exigences (GB/T 16886.2-2011, ISO 10993-2:2006, IDT)
GB/T 16886.20 Évaluation biologique des dispositifs médicaux - Partie 20 : Principes et
méthodes de test d'immunotoxicologie des dispositifs médicaux (GB/T 16886.20-2015,
ISO/TS 10993-20:2006, IDT)
YY/T 0771.1 Dispositifs médicaux utilisant des tissus animaux et leurs dérivés - Partie 1 :
Application de la gestion des risques (YY/T 0771.1-2009, ISO 22442-1:2007, IDT)
Pharmacopée chinoise, édition 2010
éviter une destruction excessive. La gamme de distribution granulométrique recommandée de
l'échantillon traité est (0 μm ~ 90 μm). Exemples de différents types d'échantillons
Le traitement est donné à l’annexe B.
Remarque 1 : Les matières biologiques d’origine animale sont principalement composées de protéines structurelles, telles que
comme les fibres de collagène. Les expérimentateurs doivent utiliser des méthodes de préparation d'échantillons appropriées, pour garantir
que l’antigène α-Gal dans l’échantillon de test est entièrement exposé.
Remarque 2 : Trois échantillons parallèles sont préparés pour chaque échantillon ; la valeur moyenne est prise comme
résultat de mesure final.
Remarque 3 : Selon la demande du client, 3 échantillons de numéros de lots différents ou identiques
le numéro de lot peut être pris pour évaluer la stabilité du processus de différents lots ou du même
lot.
6.2 Préparation des matériaux de contrôle du système de test
6.2.1 Généralités
Étant donné que les méthodes de la présente norme sont influencées par de nombreux facteurs, il convient
des substances de contrôle doivent être utilisées pour vérifier la rationalité du système d'essai avant
Il est recommandé d'utiliser des cellules de myélome de souris (SP2/0) ou des globules rouges de lapin
(RRBC). Si d'autres substances de référence sont sélectionnées, leur efficacité doit être
confirmé.
6.2.2 Cellules SP2/0
SP2/0 (ATCC CRL-1581TM) est obtenu à partir de la fusion des cellules B de la rate de BALB/c
souris immunisées avec des globules rouges de mouton et des cellules de myélome de souris. Il ne
sécrètent des immunoglobulines. Utilisez le milieu complet RPMI1640 pour la culture, jusqu'à ce que la croissance
l'état est bon ; ajuster la concentration cellulaire à 1 × 107 cellules/mL pour une utilisation ultérieure.
6.2.3 RRBC
6.2.3.1 Il est recommandé d'utiliser des lapins néo-zélandais sains et non testés, de qualité SPF.
d'autres souches de lapins sont sélectionnées, leur adéquation doit être expliquée. Animaux
doit être conservé au moins 5 jours avant le prélèvement sanguin, pour s'adapter au laboratoire
environnement. Tous les tests sur les animaux doivent être effectués dans des laboratoires approuvés par
agences nationales d'accréditation et dans le respect de toutes les réglementations applicables en matière
le bien-être des animaux de laboratoire, en attendant, il devrait également se conformer aux exigences de
GB/T 16886.2.
6.2.3.2 Prendre 20 ml de sang total de lapin frais. L'ajouter dans un erlenmeyer
contenant des billes de verre. Agiter pendant 10 minutes pour éliminer la fibrine. Ajouter environ 10 fois la
quantité de solution de chlorure de sodium à 0,9 %. Bien agiter. Centrifuger à 2000 tr/min pendant 5
minutes. Retirer le surnageant. Laver les globules rouges précipités 3 fois, en utilisant
Solution de chlorure de sodium à 0,9 %, selon la méthode ci-dessus, jusqu'à ce que le surnageant soit
plus rouge. Les globules rouges obtenus sont mélangés avec du chlorure de sodium à 0,9 %
solution à 1 × 107 cellules/mL. Conservez-la à 4 °C pour une utilisation ultérieure.
6.2.4 Étapes de préparation
Remettre en suspension 1 × 106 cellules SP2/0 ou RRBC dans 40 μL de BSA à 1 %. Bien mélanger. Diluer 20 μL
de cellules pour créer un total de 4 gradients de concentration (y compris un groupe vierge sans
cellules). Ajoutez une solution BSA à 1 % à la solution mère de cellules et au diluant, respectivement, 80
μL/tube. Ensuite, le rapport volumique du groupe de concentration le plus élevé contenant la cellule
la solution mère est de 20 %. Le rapport volumique des groupes restants diminue selon un gradient
avec la dilution de doublement. Trois trous répliqués pour chaque gradient de concentration sont
disponible à l'utilisation.
6.3 Regroupement des tests
Le groupement de tests comprend :
a) Groupe de matériaux sans processus d’élimination de l’antigène α-Gal ;
b) Groupe de matériaux après le processus d’élimination de l’antigène α-Gal ;
c) Groupe témoin négatif, matériaux ne contenant pas d’antigène α-Gal ;
d) Groupe témoin du solvant d'essai.
6.4 Détermination de la dilution optimale de l'anticorps M86
6.4.1 Généralités
Il peut y avoir certaines différences dans la puissance des différents lots d’anticorps M86 ;
la dilution optimale de chaque lot d'anticorps M86 doit être déterminée. Divisez le
Répartissez le M86 disponible dans le commerce dans des volumes appropriés. Conservez-le pour une utilisation ultérieure.
6.4.2 Préparation de l'étalon d'antigène α-Gal
Prenez l'α-Gal-BSA. Dissolvez-le dans la solution de revêtement à pH 9,6. Ajoutez-le à la microplaque,
100 μL/trou. La concentration finale recommandée est de 1 μg/mL ~ 10 μg/mL.
pendant une nuit à 4 °C. Utiliser 1% BSA scellé pour une utilisation ultérieure.
6.4.3 Dilution optimale de l'anticorps M86
Ajoutez 100 μL de solution d'anticorps M86 diluée à chaque microplaque, pour un total de 8
dilutions. La dilution initiale recommandée est de 1:25. La dilution est comprise entre 1:25 et
1:3200. Bien mélanger. Incuber sous agitation à température ambiante pendant 1,5 heure. Utilisation
solution de lavage pour laver la plaque trois fois. Ajouter un anti-souris secondaire marqué HRP
anticorps. Incuber sous agitation à 37 °C pendant 1 heure. Utiliser ensuite la solution de lavage pour laver
la plaque trois fois. Après le développement de la couleur, utilisez un lecteur de microplaques pour lire le
valeur d'absorption. Tracez une courbe de réaction entre la valeur d'absorption et la
dilution M86 correspondante. Prenez deux fois la valeur de concentration de la dilution,
entre juste dans la zone de plateau de la courbe de réaction, comme dilution optimale. Diluez le
anticorps M86 stocké avant chaque utilisation.
6.5 Co-incubation de l'anticorps M86
Ajouter 160 μL de la solution d'anticorps M86, à la dilution...