GB/T 38568-2020 英語 PDF (GBT38568-2020)

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GB/T 38568-2020: 工業用微生物株の増殖表現型の判定 - 微小液滴濁度
38568-2020 国際電気標準会議
イギリス
国家標準の
中華人民共和国
ICS07.080
21 21
成長表現型の決定
産業微生物株 - 微小液滴濁度
発行日: 2020年3月31日
実施日: 2020年3月31日
発行元：国家市場監督管理総局
中華人民共和国標準化管理局
中国。
目次
序文…3
1 範囲 ... 4
2 規範的参照 ... 4
3 用語と定義 ... 4
4 原則…4
5 試薬または材料...4
6 器具および装置 ... 5
7 決定手順 ... 6
8 結果分析 ... 7
成長表現型の決定
産業微生物株 - 微小液滴濁度
1 範囲
この規格は、成長表現型の判定方法を規定する。
微小液滴濁度による産業微生物株の検出。
この規格は、細菌の増殖表現型の判定に適用される。
工業用発酵用の真菌および微細藻類株。
2 規範的参照
この文書の申請には以下の文書が必須です。
日付の付いた参照については、この文書には日付の付いたバージョンのみが適用されます。
日付のない参考文献については、最新版（すべての修正を含む）がこれに適用される。
書類。
GB/T 6682、分析実験室用水 - 仕様と試験
方法
GB/T 14926.43、実験動物 - 細菌学的モニタリング - 染色、
培地と試薬
3 用語と定義
この文書には以下の用語と定義が適用されます。
3.1 参照株
発酵性能が明らかである特定株は、
発酵生産。
4 原則
マイクロ流体チップによって単一細胞をカプセル化した液滴を生成し、培養します。
液滴内の細菌の面積に応じて増殖率を計算します。
5 試薬または材料
特に指定がない限り、すべての試薬は分析試薬です。
7 決定ステップ
7.1 株の活性化
7.1.1 工業用培地に対応する固体培地と液体培地を準備する
GB/T 14926.43に規定された方法に従って微生物を培養する。
参照株と株保存液を浸す滅菌接種ループ
評価対象株の細菌溶液をそれぞれ測定し、線を引く。
固体プレート;対応する温度とその他の条件を選択して
生産プロセスのパラメータに従って栽培を行い、
単一コロニーが成長します。それぞれ3つの参照株と3つの単一コロニーを選択します。
評価する株を5mLの試験管に接種する。
液体媒体; 対応する温度と速度を選択します
生産プロセスのパラメータを調整し、対数段階まで栽培します。
7.1.2 活性化プレートから微生物株のモノクローンを採取する
ペトリ皿; 5mLの液体培地の入った容器に入れ、
生産工程に応じた温度と速度
パラメータ;安定期まで培養する。上清を除去した後、
PBS溶液を加え、洗浄を3回繰り返します。
7.2 微生物液濃度の選択
基礎培地を使用して希釈し、細胞懸濁液の濃度を得る。
約6×105CFU/mL。
7.3 アガロース溶液の調製
分析天秤を使用して、超低融点アガロース 0.02 g を量ります。
滅菌したEPチューブに入れ、滅菌した基礎培地1mLを加え、加熱する。
溶解し、2%（質量濃度）の溶液に調製します。0.22μmの
熱いうちに濾過するための滅菌フィルター。必要に応じて準備してください。
7.4 単一細胞液滴生成
7.4.1 微生物液とアガロース溶液をそれぞれ500μLずつ採取する
等量ずつ混ぜます。
7.4.2 チップを取り、油相にそれぞれ200μLのフルオロカーボンオイルを加える。
チップの入口と水相に低融点アガロース100μLを加える
入口; シリンジをチップ出口に接続します。
7.4.3 チップをホットプレート（温度安定性±1℃、範囲
30℃～37℃）；シリンジのプランジャーを2mLのマークに固定し、液体を
注射器の負圧を通してチップに入り、生成を開始します
液滴を生成します。液滴の生成には約 2 分かかります。