GB 5009.212-2016 영문 PDF (GB5009.212-2016)

배송: 3초. 실제 PDF + 송장을 다운로드하세요.
1분 안에 견적을 받으세요: GB 5009.212-2016을 클릭하세요
역사적 버전: GB 5009.212-2016
True-PDF 미리보기 (비어 있으면 다시 로드/스크롤)

GB 5009.212-2016: 조개류의 설사성 조개독의 결정
영국 특허 제5009.212-2016호
국가 표준
중화인민공화국
국가식품안전기준 - 결정
조개류의 설사성 조개 독
발행일: 2016년 12월 23일
구현일: 2017년 6월 23일
발행처: 국가보건가족계획위원회
중화인민공화국
중국 식품의약품안전청.
목차
서문 ... 3
1 범위 ... 4
마우스 생물학 방법 ... 4
2 원칙 ... 4
3 시약 및 재료 ... 4
4 기구 및 장비 ... 5
5 분석 절차 ... 5
6 분석 결과의 표현 ... 7
효소결합면역흡착검사법(ELISA법) ... 8
7 원칙 ... 8
8 시약 및 재료 ... 8
9 기구 및 장비 ... 9
10 분석 절차 ... 10
11 분석 결과의 표현 ... 11
12 기타 ... 11
액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법 ... 12
13 원칙 ... 12
14 시약 및 재료 ... 12
15 기구 및 장비 ... 14
16 분석 절차 ... 14
17 분석 결과의 표현 ... 18
18 정밀도 ... 19
19 기타 ... 19
부록 A 상업용 키트의 평가 기술 매개변수 ... 20
부록 B 설사성 조개 독의 독성 인자 ... 21
부록 C 설사성 조개류의 다중 반응 모니터링 크로마토그램
독극물 표준 용액 ... 22
국가식품안전기준 - 결정
조개류의 설사성 조개 독
1 범위
본 표준은 마우스 생물학 방법, 효소 결합 면역 흡착 검사를 규정합니다.
(ELISA 방법) 및 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법
조개류의 설사성 패독의 확인.
본 표준에서는 마우스 생물학 방법 및 효소 결합 면역 흡착 검사법을 사용합니다.
(ELISA 방법)은 설사성 조개독의 판정에 적용 가능합니다.
조개류 및 조개류 제품; 액체 크로마토그래피 - 탠덤 질량 분석법
설사성 조개독 오카다산(OA)의 측정에 적용 가능
조개류 식용부에서의 디노피지스토신-1(DTX-1) 및 디노피지스토신-2(DTX-2)
및 조개류 제품(염장 제품 제외)
마우스 생물학 방법
2 원칙
아세톤을 사용하여 조개류에서 설사성 조개 독(DSP)을 추출합니다.
무수에테르로 분배하고 감압 및 증발시키고 식염수를 취한다.
분산매로 1% Tween-60을 함유한 DSP 주사제를 제조한다.
현탁액. 주사 가능한 현탁액을 마우스의 복강에 주입합니다. 관찰
쥐의 생존율을 계산합니다.
3 시약 및 재료
달리 규정되어 있지 않는 한, 이 방법에 사용되는 모든 시약은 분석적으로
순수. 물은 GB/T 6682에 규정된 1등급 물이어야 합니다.
3.1 시약
3.1.1 아세톤(C3H6O).
3.1.2 무수 에테르(C4H10O).
3.1.3 트윈-60(C64H126O26).
3.1.4 염화나트륨(NaCl).
5.2.2 동결 샘플
실온에서 동결된 샘플을 반 동결 상태가 될 때까지 해동합니다.
껍질을 벗긴 냉동 샘플은 5.2.1의 방법에 따라 세척하고 껍질을 엽니다.
껍질을 헹구고 껍질 속의 살을 꺼냅니다. 껍질에 붙어 있는 얼어붙은 조각들을 제거합니다.
껍질 살의; 수분을 닦아냅니다. 껍질 살을 조각으로 자릅니다.
5.3 샘플 추출
이미 조각으로 잘린 껍질 고기 샘플 200g을 무게 측정하여 다음 용기에 넣으세요.
균일한 컵. 부피 비율에 따라 아세톤을 3배량 첨가합니다.
그런 다음 2분 이상 균질화합니다. 잘 균질화된 물질을 브리넬에 붓습니다.
깔때기를 사용한 다음 추출하고 여과합니다. 여과액을 모읍니다. 각각 아세톤을 사용합니다.
잔류물의 양의 2배, 잔류물을 두 번 헹구십시오. 여과액과
위에 언급된 여과액. 여과액을 500 mL 둥근 바닥 플라스크로 옮깁니다.
56°C±1°C에서 감압하고 농축하여 아세톤을 제거하여 기름기가 없어질 때까지 합니다.
물질이 액체 표면으로부터 분리됩니다.
무수에테르 100ml ~ 200ml를 사용하여 기름기 있는 물질을 녹인 후 붓는다.
분리 깔때기에 넣습니다. 소량의 무수 에테르를 사용하여 둥근 부분을 헹굽니다.
바닥 플라스크; 이들을 합친 후 분리 깔때기에 붓습니다. 작은
아래쪽 끈적끈적한 벽 부분을 씻을 물의 양. 약간 진동(생성 방지)
에멀전); 층화를 위해 가만히 두십시오. 그런 다음 수성층(아래쪽)을 제거하십시오.
층).
에테르 양의 절반에 해당하는 물을 사용하여 에테르 층을 두 번 씻어냅니다.
물층을 제거한 후 에테르층을 250mL 또는 500mL로 옮깁니다.
둥근 바닥 플라스크. 35 °C ± 1 °C에서 감압하고 농축하여 에테르를 제거합니다.
무수에테르 소량을 사용하여 농축된 물질을 다음 단계로 옮깁니다.
50ml 또는 100ml 둥근 바닥 플라스크. 다시 감압하여 농축합니다.
에테르를 제거하세요.
1% Tween-60 식염수 용액을 사용하여 농축된 물질을 모두 다음 용기로 옮깁니다.
스케일 시험관을 사용하여 10mL로 희석합니다. 완전히 흔들어 균질한 것을 준비합니다.
현탁액. 현탁액 1mL는 샘플 20g과 동일합니다. 이것을 가져 가십시오.
현탁액을 시험용 스톡 용액으로 사용함.
테스트 스톡 용액을 사용하여 마우스에 주입합니다. 24시간 이내에 2~3마리의 마우스가 죽으면 진동합니다.
시험용액을 균일한 현탁액이 되도록 한 후 1%를 사용한다.
Tween-60 식염수 용액을 표 1에 따라 단계적으로 4로 희석합니다.
희석제의 16배 또는 16배를 넣어 완전히 섞는다. 그런 다음 표 1에 따라,
쥐에게 주사를 놓다.
5.4 마우스 테스트
건강한 수컷 마우스 ICR 균주 6마리를 선택하여 체중: 16g ~ 20g. 무작위로 나누어
실험군과 용매 대조군의 두 그룹으로 나누었습니다. 각 그룹에 쥐 3마리씩.
효소 결합 면역 흡착 검사(ELISA)
방법)
7 원칙
경쟁적 효소 결합 면역 반응성에 따라 해리성 설사
조개독은 설사 조개독 항체에 대한 효소 표지자와 경쟁합니다.
결합되지 않은 효소 마커는 헹굼 단계에서 제거됩니다. 효소 기질을 추가합니다.
그리고 구멍에 발색 시약을 넣고 배양합니다. 결합된 효소 마커
무색의 발색제를 파란색 제품으로 전환합니다. 반응 종료 유체를 첨가한 후,
색상은 파란색에서 노란색으로 바뀝니다. 파장 450nm에서 ELIASA를 사용하여
미세다공성 용액의 흡광도 값을 측정합니다. 설사의 함량
샘플의 조개 독은 흡광도 값에 반비례합니다.
표준곡선에 맞춰 정량적 계산을 실시한다.
8 시약 및 재료
달리 규정되어 있지 않는 한, 이 방법에 사용되는 모든 시약은 분석적으로
순수. 물은 GB/T 6682에 규정된 1등급 물이어야 합니다.
8.1 시약
8.1.1 메탄올(CH3OH).
8.1.2 인산수소나트륨 12수화물 (Na2HPO412H2O).
8.1.3 염화나트륨(NaCl).
8.1.4 염화칼륨(KCl).
8.1.5 인산이수소칼륨(KH2PO4).
8.1.6 트윈-20(C58H114O26).
8.1.7 소 혈청 알부민(BSA).
8.1.8 효소 마커.
8.1.9 과산화수소(H2O2).
8.1.10 3,3,5,5-테트라메틸벤지딘(TMB, C16H20N2).
8.1.11 황산(H2SO4).
8.2 시약의 준비
10 분석 절차
10.1 샘플 수집
5.1과 동일.
10.2 샘플 준비
5.2와 동일.
10.3 샘플 추출
이미 조각으로 잘린 샘플을 균질화합니다. 10g을 정확하게 무게 측정합니다.
(0.1g까지 정확도) 샘플; 메탄올 용액(90%) 50mL을 첨가합니다.
1분 ~ 2분간 균질화합니다.